提取蛋白无丢失?你对 RIPA 提蛋白存在一点误区
栏目:专题    日期:2016-12-23    来源:市场部

        2016年12月美国发表的最新文献,对 RIPA 提取蛋白的缺陷进行了研究和分析。

       RIPA BufferRadio Immunoprecipitation Assay  Buffer)作为一种简单高效的细胞裂解液已经被使用了几十年,主要用于提取细胞或者组织中的总蛋白。在蛋白质研究领域,RIPA Buffer 已经成为了所谓的「金牌」标准,似乎没有其他方法与其做过平行比较。现在,我公司Minute系列柱式法蛋白提取试剂盒可以很方便地和 RIPA 提取法做平行实验比较。



实验方法:

分别使用柱式法和 RIPA 裂解液提取小鼠肝脏和小鼠脾脏总蛋白。

Lane1. 柱式法提取按照厂商说明进行操作,提取蛋白后无不可溶性组分产生。

Lane2. RIPA 裂解液提取,组织进行匀浆后,加裂解液摇床孵育 30 分钟后,12 000 xg 离心 10 分钟。

Lane3. RIPA 提取残留的不溶性组分使用柱式法再次进一步提取。

12% SDS-PAGE 结果如下:

 




实验结果:

1.两种方法提取的蛋白谱相似,但是不完全相同。通过 RIPA 提取后,在低分子量范围(lane 2)蛋白显著减少,而在剩余的不溶部分再次提取后(lane 3)显著增加,lane 2 lane 3 蛋白谱有很大差别,大量蛋白在不可溶部分丢失,蛋白质的丢失是不成比例的,并且不具有选择性。

2.两种不同样品丢失的蛋白谱明显不同,丢失蛋白的范围覆盖了大于 120 KD 到小于 20 KD 的蛋白。

 

    基于这些研究结果,很明显,RIPA裂解液提取的总蛋白是不完整的,是有改变的。仅仅使用 RIPA 裂解液提取蛋白进行定性和定量实验会出现许多问题,应考虑其他方法进行数据验证。

 

文章来源:BioTechniques 61:272-275 (December 2016) doi 10.2144/000114477

图片来源:Bio Techniques

 




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