经过了一，二，三，....六个月的假期休整，终于怀着激动的心情踏进了实验室，然鹅，好久不摸移液器的手像生了“锈”？明明天天做的WB实验，脑袋却像断了片，一切都要翻笔记从新来？太多组WB需要重启，重复重复再重复，早起晚归还是完不成?
WB的起跑线是哪里？是熟记WB的流程吗？是操作手法吗？还是运气？起跑线当然是WB的第一步---蛋白样品制备啦！蛋白样品质量关乎WB成功与否，只有高质量高丰度的目的蛋白加合适的抗体再加上最优的WB 步骤，才能打赢WB这场硬仗！
如何让WB赢在起跑线？
确定目的蛋白丰度
研究前，我们可以通过专业的数据库和已经发表的文章来确定目的蛋白的表达情况。
推荐使用如下网站进行蛋白表达量查询：
http://www.biogps.org
https://www.proteinatlas.org
确定制备何种蛋白
如果研究的目的蛋白在样本中表达稳定，且仅做定性半定量，进行总蛋白提取即可。
如果研究的目的蛋白表达很弱，或是需要确定目标蛋白的位置及分布，我们是很难用总蛋白来完成的，这时需要进行亚细胞结构分离或者细胞组分分离，富集目标蛋白再进行下游实验。
例如：
*目标蛋白在胞质和胞核内均有表达，想验证目标蛋白在两个不同组分中表达量的对比，那就需要进行细胞样品的胞质胞核组分分离，分别用胞质和胞核蛋白组分检测。（胞质胞核如何分离点这里）
Kong, P., Yu, Y., Wang, L., Dou, Y. Q., Zhang, X. H., Cui, Y., ... & Cui, W. (2019). circ-Sirt1 controls NF-κB activation via sequence-specific interaction and enhancement of SIRT1 expression by binding to miR-132/212 in vascular smooth muscle cells. Nucleic Acids Research.Doi: 10.1093/nar/gkz141
*研究蛋白定位或研究蛋白转运过程，则就需要进行细胞组分分离，分别检测细胞核，细胞浆，细胞器，细胞膜，内体等组分。（如何进行细胞组分分离点这里）
Georgiou D. K., et al. (2015). Ca2+ Binding/Permeation via Calcium Channel, CaV1.1, Regulates the Intracellular Distribution of the Fatty Acid Transport Protein, CD36, and Fatty Acid Metabolism doi: 10.1074/jbc.M115.643544 jbc.M115.643544.
*目标蛋白在细胞器上，蛋白表达量较低，用总蛋白验证检测条带较弱，需要进行细胞器富集后再检测，提高检出效率。（细胞器如何分离点这里）
Kashiwagi Y, Nagoshi T, Yoshino T, Tanaka TD, Ito K, Harada T, et al. (2015) Expression of SGLT1 in Human Hearts and Impairment of Cardiac Glucose Uptake by Phlorizin during Ischemia- Reperfusion Injury in Mice. PLoS ONE 10(6):e0130605. doi:10.1371/journal.pone.0130605.
确定提取方法
确定好需要提取的蛋白种类后，就要选择合适的提取方法了。
总蛋白提取要选择能够获取样品中完整且真实的蛋白谱的方法，也就是尽可能获取最大的蛋白质溶解度，减少蛋白质损失的方法。
亚细胞结构分离提取的方法（例如核蛋白，膜蛋白，细胞器蛋白等）要选择操作简便快捷，降解少，且适于下游实验的方法。
如何开启WB倍速模式？
你的蛋白制备愿望是这样吗？
1、样品多，操作简短点，快点快点，再快点
2、迅速拿到有效结果
3、减少重复次数
Bingo！
柱式法蛋白提取可以做到：
-
一分钟提取真正意义上的总蛋白，无丢失
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一小时完成亚细胞结构分离
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提取的蛋白适于各类下游应用
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蛋白质量高，得率高，利于下游检测
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结果稳定可重复性好
了解柱式法总蛋白提取点这里
了解柱式法膜蛋白提取点这里
了解柱式法细胞器分离点这里
高质量的蛋白样品是WB成功的保证，Invent为您的蛋白样品保驾护航，柱式法快速高效制备高质量蛋白样品，为您的下游检测降低难度，快速简单的操作，让您得到稳定可重复的好结果，时间这么赶，为何不让您的实验赢在起跑线？如果您对蛋白样品制备有任何疑问，欢迎您与我们的技术专家讨论！
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