目的蛋白是核蛋白,我该拿它怎么办?
栏目:技术    日期:2018-12-19    来源:admin

细胞核(nucleus)是真核细胞内最大、最重要的细胞结构,是细胞遗传与代谢的调控中心,是真核细胞区别于原核细胞最显著的标志之一(极少数真核细胞无细胞核,如哺乳动物的成熟的红细胞,高等植物成熟的筛管细胞等)。它主要由核膜(nuclear envelope)、核孔(Nuclear Pores)、染色质(chromatin)、核仁(nucleolus)、核基质(nuclear matrix) 等组成。

(此图片来源于lumenlearning,仅供学习使用)


核蛋白因在细胞内含量占比低,且一般的提取方法不易富集,所以研究过程通常较为困难。如果您的研究正好遇到类似问题,可以参考以下应用方案,帮您加速核蛋白研究的进程。


核蛋白WB,IP等实验


WB,IP等实验是蛋白研究的经典实验,当目的蛋白是核蛋白时,尽管它表达量不低,但是结果却也不太理想,那是为什么呢?很有可能你的样品里根本就不存在你的目标蛋白!不存在,不存在!


请看以下案例:

(此实验结果由中科院健康所谢老师提供)

使用5*10^6次方GIST肿瘤细胞,分别用实验室自制IP buffer,RIPA,Invent 总蛋白提取试剂盒(SN-002天然裂解液)提取蛋白,等量上样后检测。看到以上结果,想想为什么提取以后目标蛋白就不存在了呢?因为核蛋白被你丢掉了!对的,就是提取离心取上清这个举动,你的目标蛋白随着不可溶性组分消失在了你的垃圾桶中,此生不再见!而相比较,Invent总蛋白提取试剂盒对核蛋白提取效率更高。


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低丰度及NF-kB信号通路研究

假如目标蛋白表达量不高,用总蛋白不易检测;或者研究与先天和适应性免疫、炎症、应激反应、B 细胞发育和淋巴器官形成等相关的经典NF-κB信号通路,那么就需要进一步将细胞质与细胞核分离。


如以下案例:

Huang, C. W., Feng, W., Peh, M. T., Peh, K., Dymock, B. W., & Moore, P. K. (2016). A novel slow-releasing hydrogen sulfide donor, FW1256, exerts anti-inflammatory effects in mouse macrophages and in vivo. Pharmacological Research.



▲样品:RAW264.7 巨噬细胞分离细胞质,细胞核组分

经过不同处理后,细胞核中p65,细胞浆中p65/p-IκBα/IκBα表达变化,使用细胞浆内参(actin)和细胞核内参(Lamin A/C)检测分离纯度。

Invent公司提供胞浆胞核分离试剂盒,仅需15分钟即可将细胞组分分离。新鲜/冷冻组织也有专用试剂盒哦!


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核蛋白定位及转运研究


如需进行细胞核内目标蛋白的准确定位,或是研究蛋白在细胞核内的转运情况,那就需要进一步将细胞核细分。


如以下案例:

Invent可提供核膜蛋白提取及核基质提取工具


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① 核膜蛋白提取

② 核基质提取



DNA结合蛋白/组蛋白研究



组蛋白和其他DNA结合蛋白在染色体基因调控和翻译后修饰中发挥着重要作用。组蛋白的核心部件可以通过甲基化,乙酰化,磷酸化和SUMO化修饰。这些修饰对于基因表达,调控,DNA修复和染色体凝集至关重要。然而这部分蛋白非常难获取,Invent为大家提供了如下解决方案。


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目标蛋白是核蛋白我该怎么办?看完以上解决方案,你是否可以放心的说不要紧,一切尽在掌握中!样品制备是各类实验的重要一步,样品有问题,不论下游实验多么努力,都是白费,所以成功的实验,需要好的开头!快联系我们获取更多详细方案吧!




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